葡萄是一种具有重要经济价值的园艺植物,对盐胁迫中度敏感,土壤盐分含量高于100mM会导致葡萄产量降低和糖分含量显著下降。随着我国土壤盐渍化日趋严重,葡萄主产区面临威胁,葡萄生产上亟需加快耐盐种质的选育。对葡萄种质进行耐盐性评价并筛选耐盐种质,是葡萄耐盐育种的重要前提。
由于植物响应盐胁迫涉及离子驱逐、离子转运、水通道、渗透调节物质、次级代谢、细胞壁重整以及响应协调等多个代谢通路,响应机制复杂,因此,相关生理指标能够从不同方面反应出葡萄对盐胁迫不同程度地的响应,进而被用于评价葡萄耐盐性。另一方面,基于形态指标的综合表型评价仍然是葡萄耐盐评价以及种质筛选的重要方法,如盐害等级、盐害指数等。此外,由于土壤盐胁迫会直接导致根系生长受阻并进一步阻碍地上部的生长,这将直接表现在葡萄生物量积累的减少,因此,生物量也能够反应出葡萄抵抗盐胁迫的强弱。Walker等通过连续5年研究发现随盐浓度升高导致7种葡萄砧木的一年生枝条生物量逐渐降低。Vila通过测定3个葡萄砧木及嫁接组合在不同盐浓度胁迫下的地下部与地上部生物量,发现葡萄耐盐性与种质的原生活力有关。生物量也被相关学者用作表型指标,来评价葡萄植株的耐盐性。然而,葡萄种质的原生活力是否有助于其抵抗或适应盐胁迫仍缺乏足够的证据支持。为此,本研究选择具有广泛遗传背景的37份葡萄种质,通过比较各种质幼苗在盐胁迫与未胁迫处理下的生物量差异,来探析种质原生活力与其耐盐性的关系,并基于此对葡萄种质盐胁迫下的生长势进行评价分析,以期为葡萄耐盐种质的筛选提供参考。
一、材料与方法
1.1 试验材料
供试材料为37份葡萄种质的一年生扦插苗(表1),扦插段母树种植于河北省农林科学院昌黎果树研究所施各庄创新基地的葡萄资源圃。一年生苗根部剪留5cm后种植于营养钵(5cm×13cm)中,培养基质配方为沙子:珍珠岩:草炭土=1:1:1(0.8L)。
1.2 处理方法
处理方法参考袁军伟的方法。2023年5月25日,在日光温室内,待幼苗长至5~6片叶时,选取生长一致的健康营养钵苗为试材,放入营养钵托架上,随后放入长4m×宽2m×深0.2m的盐池或水池中。营养钵底部有3个小孔,营养钵托架使营养钵底部不接触池底。所用NaCl浓度为100mM,以等量蒸馏水为对照。池内溶液深度保持在4cm,每天傍晚缓慢补充蒸馏水至4cm深,每3天更换一次盐水或蒸馏水。每个种质每个处理设3个重复。
1.3 测定指标
待处理到第14天,植株叶片边缘开始出现失水枯萎,将池中盐溶液或水排出。拆除营养钵,取出完整的葡萄植株,做好标记,带回实验室。用蒸馏水清洗植株根部残留基质,用剪刀将根、叶片(带叶柄)、茎分离,茎为当年生绿枝,需用剪刀分割,分别将装进信封并标记。所有样品均放置于65℃烘箱中烘干。总干重=叶干重+茎干重+根干重。
1.4 数据处理与分析
所有样本的叶干重、茎干重、根干重采用单因素方差分析,采用图基法进行事后检验。各种质盐胁迫与对照之间总干重通过T-test进行比较,比较前进行方差齐性检验。数据的处理与分析分别在Excel 2019和SPSS 26中完成。主成分分析、系统进化分析和图形绘制在Origin 2021中完成。
二、结果与分析
2.1 盐胁迫对不同葡萄种质叶干重的影响
同一生长期内,种质平均叶干重0.37~2.93g·株-1,盐胁迫后降至0.23~2.24g·株-1。盐胁迫导致平均叶干重从1.49g·株-1降至1.14g·株-1,多数葡萄种质的叶干重下降,尽管除了CR6外,这种下降并不显著。值得注意的是,在部分种质中发现盐胁迫下叶干重均值升高,如SO4、香妃、CR1、140R、巨峰、CR4、山河二号以及101-14。盐胁迫后叶干重下降幅度较大的依次为玫瑰香、CR6、A33、A31、宝光、阳光玫瑰、5C等,下降幅度45%~60%(相比对照)。从盐胁迫下叶干重的比较来看,贝达的叶干重最高,相比对照小幅下降9%,其次为101-14、5BB、Valiant、山河二号、黄金蜜等,其中Valiant和CR5在正常生长情况下的叶干重最高,经盐胁迫出现较大降幅后仍具有较高叶干重。双丰在盐胁迫与正常情况下的叶干重均为最低,且其叶干重下降了39%。
2.2 盐胁迫对不同葡萄种质茎干重的影响
相比于叶干重,盐胁迫后茎干重下降幅度较为明显,从0.15~2.62g·株-1降至0.09~1.17g·株-1,均值由0.88g·株-1降至0.61g·株-1,其中Valiant、CR5、CR6茎干重显著下降。此外,与叶干重相似,山河二号、101-14、140R、CR4、CR1、巨峰、香妃、SO4以及A32茎干重均值升高,但升高幅度较小。茎干重下降幅度较大的依次有CR6、A31、Valiant、双丰、CR5、阳光玫瑰、CR8等,下降幅度50~72%。从盐胁迫下茎干重的排序可看出,茎干重较高的Valiant、CR5、贝达、5BB、黄金蜜、8B等,在正常生长情况下同样可产出较高的茎干重,虽然部分种质盐胁迫后茎干重有较大的下降。双丰的茎干重最小,且下降幅度大于叶干重。同时发现,5C、A33、1202C茎干重相较叶干重在评价种质中排序明显提前,这可能是这些种质叶片相对较小或者茎较粗/长的原因;在巨峰、Dogridge等种质中出现相反的情况,这可能是这些种质叶片相对较大或茎较细/短的原因。
2.3盐胁迫对不同种质根干重的影响
根干重占植株总干重比例较小,盐胁迫前为9.6%,盐胁迫后为9.9%。同样条件下,根干重在种质间的差异大于叶干重与茎干重,盐胁迫前Valiant的根干重最大,为0.82g·株-1,是双丰的叶干重(0.03g·株-1)近30倍,盐胁迫后脆光的根干重最大,为0.38g·株-1,是双丰(0.03g·株-1)的14倍。除Valiant和贝达之外,盐胁迫后各种质的根干重下降并不显著,甚至脆光、巨峰、Fercal、101-14、蜜光、5BB、BRNo2、CR4、香妃、CR3、A32的根干重均值呈现不同程度的升高。盐胁迫后,脆光、CR5、140R等根干重较高,且与对照相比均值差异较小;双丰、A32、SO4等根干重低,并与对照处理无明显差异。
2.4 盐胁迫对不同种质总干重的影响
盐胁迫后,多数葡萄种质的总干重下降,均值由2.62g·株-1下降至1.93 g·株-1。在对照组中总干重较高的种质经盐胁迫后总干重下降幅度较大,在Valiant、CR6、摩尔多瓦、红地球、CR8中下降明显。对照组中总干重较低的种质经盐胁迫后总干重下降幅度较小,在一些种质中反而有总干重均值升高趋势,如在CR1经盐胁迫后总干重明显升高。尽管如此,总体看来,胁迫前生物量积累较高的种质在盐胁迫后其总生物量仍旧较高。盐胁迫下总干重较高的依次有贝达、Valiant、5BB、CR5、101-14、黄金蜜等,较低的主要有双丰、A32、SO4、美人指等。
2.5 盐胁迫前生物量对盐胁迫后生物量的影响
为探究葡萄先天生长活力对其盐胁迫下生物量的影响,本研究对各种质盐胁迫前后的叶干重、茎干重、根干重与总干重进行了线性回归分析。结果显示,茎干重能够解释盐胁迫后茎干重变异的53%,而叶干重则仅能解释34%的变异,此外根干重和总干重可解释各自变异的46%。这表明,葡萄种质的生长活力确实会影响其在盐胁迫中的表现,具有强生长势的种质在盐胁迫下更倾向于保持其生长活力上的优势,产出较高的生物量。同时表明,葡萄先天生长活力只是影响其在盐胁迫下生长表现的重要因素之一。
2.6 基于盐胁迫后生物量的综合分析
为分析不同葡萄种质在盐胁迫下生物量积累特征,基于叶干重、茎干重、根干重、总干重对37份种质进行了主成分分析与系统聚类分析。主成分分析结果显示(图6),两个主成分解释了变量的96.4%。叶干重与茎干重高度相关,根干重与两者不相关,同时因根干重在总干重中占比低,所以总干重与茎干重和叶干重高度相关。盐胁迫后,贝达、5BB等种质的特征是地上部干重较高,脆光、140R则以根干重高为特点,Valiant、CR5等在根干重以及地上部干重上均较高,而双丰、A32、SO4、美人指等则在所有干重指标中表现均较差。系统进化分析显示(图7),双丰以极弱的长势与其他种质距离较远,贝达则因长势较强而与其他种质距离较远。除了长势强的贝达和长势极弱的双丰外,进一步可在欧式距离0.7处(虚线处),将剩余葡萄种质则可归为三组。盐胁迫下长势强的代表种质有Valiant、CR5、5BB、101-14等;长势弱的有美人指、SO4、A32等;长势中等的有110R、巨峰、红地球等。
三、结论
通过对37份葡萄种质幼苗在盐胁迫与正常条件下根、茎、叶干重的比较分析,发现盐胁迫对各器官干重的影响在不同种质之间存在差异。葡萄原生的生物量,尤其是茎干重最高能够解释盐胁迫下生物量变异的53%,表明葡萄原生活力只是影响其盐胁迫下长势的因素之一。最终,37份葡萄种质依据盐胁迫生物量指标可主要归为三类,即强长势组,有贝达、Valiant、5BB等;中等长势组有110R、巨峰、红地球等;弱长势组有双丰、美人指、5C等。
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